Prolactin effects on testicular interstitial cells in primary cultures

En el presente trabajo se determinaron los efectos de la prolactina (PRL) "in vitro" sobre la esteroidogénesis testicular, utilizando un cultivo primario de células intersticiales de rata inmadura. Las células fueron cultivadas en un medio químicamente definido, con el agregado de insulina y transferrina durante 2 días a 34§C. La producción de andrógenos durante el segundo día de cultivo resultó ser significativamente mayor que en el primer día (3 alfa-Androstandiol (3 alfa-Diol) 5.14 ñ 0.46 vs. 3.74 ñ 0.10 ng/microng ADN, p < 0.001); Testosterona (T) + Dihidrotestosterona (DHT) 0.40 ñ 0.04 vs. 0.34 ñ 0.03 ng/microng ADN, p < 0.001). La curva dosis respuesta para distintas dosis de hCG mostró un ED50= 2.5 mUI/ml. El efecto agudo de la PRL (10, 100 y 1000 ng/ml) sobre la producción basal de 3 alfa/Diol se evaluó luego de 45 h de cultivo. Sólo la dosis de PRL de 1000 ng/ml reveló diferencias significativas con respcto al control y dicho efecto pordría ser debido a su contaminación con LH. En otra serie de experimentos se evaluaron los efectos de menores dosis de la hormona a tiempos prolongados. La PRL (10 ng/ml), agregada durante todo el tiempo de cultivo, causó una inhibición significativa en la producción basal de 3 alfa-Diol, mientras que la respuesta a un estímulo máximo con hCG no varió. Cuando se determinó la producción de T+DHT se observó un cambio notorio en la relación T+DHT/Diol, tanto en condiciones basales (Control: 0.09 vs. PRL: 0.38) como ante el estímulo con hCG...

Variations in soluble and particulate ABP of rat testis during sexual development

La proteína ligadora de andrógenos (ABP) fue determinada en las fracciones citosólica (cABP) y particulada (pABP), obtenidas por centrifugación diferencial de homogenatos testiculares de ratas. Se prepararon homogenatos en condiciones de estabilización para el ABP por el agregado de testosterona 350 nM al "buffer" de homogeneización. Se observó que tanto los niveles por mg/prot de cABP como de pABP eran máximos entre los 22 y 32 días de edad de la rata, disminuyendo a partir de allí durante la maduración sexual. Cuando los resultados se expresaron por órgano, ambas proteínas aumentaron con la edad del animal. La pABP pudo ser solubilizada en condiciones en que mantuvo su capacidad de unión a andrógenos, procediéndose entonces a su fotomarcación y posterior cromatografía en una columna de Sephadex G-0200, usando el ABP de citosol de epidídimo como control. Se observó que el ABP no sólo comparte con el cABP las mismas características físico-químicas para la unión de andrógenos, sino también el volumen de exclusión en la cromatografía mencionada. Dado que la pABP está solamente presente en la célula de Sertoli, probablemente represente ABP antes de ser secretado. Su localización subcelular sugiere un posible papel del ABP en la distribución de andrógenos testiculares

Acute effect of hOG on testicular and epididymal levels of androgen binding protein (ABP) in the immature rat

Se estudió en ratas inmaduras el efecto agudo de la hOG y la testosterona sobre los niveles testiculares (fracciones particulada y soluble) y epididimarios (fracción soluble) de la proteína ligadora de andrógenos (ABP). La administración de una única inyección de hOG (10 UI/rata) produjo una leve disminución de la proteína ligadora de andrógenos (ABP) en el testículo (fracciones particulada y soluble). Este efecto fue observado una y cuatro horas después del tratamiento. Simultáneamente se observó un aumento significativo en la concentración de ABP en el epidídimo (1 h: 169 ñ 5; 4 h: 182 + 5vs. control: 113 ñ13 fmol/mg proteína, media ñ ESM). El aumento en la concentración de testosterona en testículo y epidídimo sugeriría que el efecto observado podría estar mediado por la estimulación gonadatrófica de la síntese de andrógenos en la célula de Leydig. Para comprobar esta hipótesis, el efecto de la hOC se estudió en ratas tratadas previamente con aminoglutetimida para bloquear la esteroidogénesis. En este modelo experimental no se observó un aumento en la concentración de ABP epididimario por la acción de la gonadotrofina. finalmente, la administración de propionato de testosterona indujo un incremento en la concentración de ABP epididimario 4 h después del tratamiento (212 + 18vs. 127 ñ 28 fmol/mg proteína, media ñ ESM). Los resultados obtenidos sugieren que la elevación de los androgénos testiculares inducida por hOG produce un pasaje rápido de ABP desde el testículo hacia el epidídimo

Photoaffinity labeling of extracellular and intracellular androgen binding proteins

Se describe un método de marcación por fotoafinidad de la SHBG sérica humana y de conejo en un precipitado de sulfato de amonio utilizando delta6-testosterona 3H como ligando. La precipitación disminuye la contaminación con albúmina y concentra al mismo tiempo la globulina ligadora de hormonas sexuales. La marcación por fotoafinidad se realizó mediante un flash electrónico. El esteroide libre y el no unido covalentemente se adsorbieron mediante un tratamiento prolongado con una solución de carbón dextrán. La cromatografía en columna de Sephadex G-200 mostró un único pico radioactivo unido covalentemente con el volumen de elución de la SHBG. Este preparado es útil para ser utilizado en estudios de metabolización de la SHBG in vivo. Con algunas modificaciones, el método fue aplicado a la marcación por fotoafinidad del receptor citosólico de andrógenos de próstata utilizando al R 1881 como ligando. El receptor de andrógenos de citosol de próstata también fue precipitado con sulfato de amonio. Luego de marca, irradiar y calentar a 50- C el R 1881-3H no unido covalentemente fue removido mediante el tratamiento con carbón dextrán. En presencia de fotólisis previa al tratamiento con calor, la cromatografía en microcolumnas de Sephadex G-25 mostró un pico radiactivo que eluyó con el volumen de elución de las macromoléculas, el cual desaparecía en las muestras no fotolizadas previamente; sin embargo el receptor fotomarcado tuvo un coeficiente de sedimentación, luego de ultracentrifugación en gradientes lineares de sucrosa, diferente del receptor no irradiado, sugiriendo que la fotólisis generó a algún cambio en la configuración del complejo